一种中枢神经系统特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠的制备方法<%=id%>

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. 摘要　.
.本发明涉及的制备方法包括利用从129sv小鼠基因组文库克隆得到的1.8kb的神经胶质细胞酸性蛋白(GFAP)基因的5’端调控序列，构建含有两个β球蛋白绝缘子、GFAP5’端调控区、Cre重组酶基因和人生长激素基因polyA的转基因载体pGFAP-Cre-hGH。以显微注射的方法将7.6kb的转基因片段βglobin insulator-pGFAP-Cre-hGH引入191枚小鼠受精卵，其中176枚分别移植至8只假孕母鼠的输卵管中使其发育，共获得子代小鼠25只，经PCR和Southern杂交鉴定其中7只小鼠基因组上整合有Cre基因，整合率为28％。用整合有Cre基因的转基因小鼠与基因组上整合有LoxP位点和LacZ表达框的ROSA26鼠杂交，以检测Cre酶介导的重组及其活性和组织特异性。LacZ染色结果表明：GFAP-Cre转基因小鼠只在中枢神经系统中表达Cre重组酶并能在体内成功介导LoxP位点间的重组。
. 主权项　.
. 1.一种利用129sv小鼠GFAP5’端1.8Kb的调控序列制备中枢神经特异性表达Cre重酶的转基因小鼠的制备方法，主要包括以下三方面： (1)利用PCR筛选129sv小鼠基因组文库的方法克隆得到了 GFAP5’端1.8Kb的调控序列； (2)利用得到的GFAP5’端调控序列构建了包括该调控序列、 β球蛋白绝缘子、Cre重组酶基因和人生长激素polyA (hGHpolyA)在内的中枢神经系统特异性表达Cre重组酶的表达载体(pGFAP-Cre-hGH)； (3)利用构建的表达载体成功制备了基因组中整合有该表达载体的转基因小鼠。

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