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;C12N9/00
颁 证 日：
优 先 权：
申请(专利权)人：
中国科学院动物研究所
地 址：
100080北京市海淀区中关村路19号
发 明 (设计)人：
黄大卫;辛文
国 际 申 请：
国 际 公 布：
进入国家日期：
专利 代理 机构：
北京隆天律诚知识产权代理有限公司
代 理 人：
王凤华
摘要
本发明涉及一种线性表达载体的构建方法，具体地，本发明提供了一种利用非对称性切割的限制性内切酶来构建线性表达载体的方法。该方法能大大降低线性表达载体的构建成本，使这种载体的构建方法能在科研和生产中得到广泛应用。
主权项
权利要求书
1.一种构建线性表达载体的方法，其步骤包括：
(1)设计引物：
a.相邻的DN*段待连接处，设计由引物1和引物2构成的一对
引物，引物1和引物2包含与待连接片段互补的DNA序列和一段非对称性
切割的限制性内切酶识别的DNA序列，并且引物1和引物2中的酶识别序
列是同一个内切酶识别的序列；
b.启动子正向引物和终止子反向引物仅包括和扩增片段互补的DNA
序列；
(2)将上述引物1和引物2分别加入到相应的DN*段中，并分
别进行PCR扩增反应，得到扩增产物；
(3)分别纯化步骤(2)得到的扩增产物，并用非对称性切割的限
制性内切酶酶切片段中的酶识别序列；
(4)将酶切后的待连接片段混合，加入DNA连结酶，进行连接反
应，得到含目的基因的线性表达载体。
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