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;C12Q1/68
颁 证 日：
优 先 权：
申请(专利权)人：
中国科学院动物研究所
地 址：
100080北京市海淀区中关村路19号
发 明 (设计)人：
黄大卫;辛文
国 际 申 请：
国 际 公 布：
进入国家日期：
专利 代理 机构：
北京隆天律诚知识产权代理有限公司
代 理 人：
王凤华;梁挥
摘要
本发明涉及一种线性表达载体的构建方法，具体地，本方法利用(DNA+RNA)杂交体为引物，用一种只能以DNA为模板的DNA聚合酶扩增基因片段，产生含RNA突出端的扩增产物，利用相邻RNA突出端的互补性将各片段连接，达到构建线性表达载体的目的。本发明操作简单，适用范围广，不受目的DN*段序列变化的影响，构建的线性表达载体可直接用于转化宿主细胞表达目的蛋白，可以为基因表达、抗体和疫苗的生产、蛋白功能研究等领域提供技术平台。
主权项
权利要求书
1.一种线性表达载体的构建方法，其步骤包括：
1)设计引物：
a.相邻的DN*段待连接处，设计由引物1和引物2构成的一对5’
端经磷酸化的引物，引物1和引物2包含与待连接片段互补的DNA序列和
一段RNA序列，引物1和引物2的RNA序列互补配对；
b.启动子正向引物和终止子反向引物仅包括和扩增片段互补的DNA序
列；
2)分别以相应DN*段为模板，用上述引物和只能以DNA为模板的DNA
聚合酶进行PCR扩增，得到扩增产物；
3)将扩增产物片段混合，加入DNA连接酶，进行连接反应，得到含目
的基因的线性表达载体。
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