一种核糖核酸酶的提取方法<%=id%>

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专利代理机构：南京经纬专利代理有限责任公司
代理人：楼高潮
摘要
　本发明一种核糖核酸酶的提取方法，涉及植物体内一种基因产物的分离纯化方法，是属于生物化学领域。依据自交不亲和基因仅在雌蕊及花粉表达的特点，采集雌蕊花柱在1～4℃低温条件下，首先应用蛋白质提取液浸提出花柱可溶性蛋白质，将该溶液过滤后以流速0.5～1.0ml/min的速率通过CM琼脂糖凝胶阳离子交换层析柱，用350mmol·L^－1NaCl溶液将S核糖核酸酶从CM层析柱中洗脱出来后，进一步用琼脂糖凝胶阳离子交换层析柱纯化，可获得具有酶活性的S核糖核酸酶纯品。
主权项
　权利要求书 1、一种核糖核酸酶的提取方法，包含下列步骤： 1)植物样品的采集：采集开花前的大花蕾，从花蕾分解出花柱，经称重后装入塑料瓶内，保存于液氮中待用； 2)抽提液的制备(配方)：以MES/NaOH缓冲液(pH＝6.5)为制备抽提液的溶液，按溶液体积比添加3％的polyclar-AT、1.5％抗坏血酸钠和5mmol·L-1的EDTA·Na2，得到核糖核酸酶抽提液A； 3)抽提过程：在1～4℃低温条件下，取花柱样品，加入上述核糖核酸酶抽提液A进行抽取后，离心，上清液为花柱可溶性蛋白质溶液，经过孔经0.45μm的过滤网过滤后，以流速 0.5～1ml/min的速率通过CM琼脂糖凝胶(CM sepharose)阳离子交换层析柱之后，用 100～200ml的20mmol·L-1MES/NaOH缓冲液清洗上述CM层析柱，而后用100～200ml 的350mmol·L-1 NaCl溶液将核糖核酸酶从CM层析柱中洗脱下来，获得核糖核酸酶溶液B；按体积比添加4倍液的20mmol·L-1MES/NaOH缓冲液(pH＝6.5)稀释，同样经孔径0.45μm的过滤网过滤后，将其以流速0.5～1ml/min的速率通过琼脂糖凝胶阳离子交换层析柱；用100～200ml的180mmol·L-1 NaCl溶液以相同的流速来清洗上述层析柱；再用100～200ml的250～320mmol·L-1的NaCl溶液将吸附于层析柱内的核糖核酸酶全部溶出，回收得到核糖核酸酶溶液C；核糖核酸酶溶液C用按溶液体积计算100％饱和的硫酸铵沉析后离心，获得核糖核酸酶。

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