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本发明是一种生产抗癌药物工程菌即DH5a- Vnm23-H1的发酵方法研究。该法包括如下步骤:发酵培养基配方筛选和发酵工艺条件选定。配方包括酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖等组成,发酵工艺包括菌种的加入量及其最佳生长时期,工程菌生长和诱导表达的时间及温度、加糖时刻及方式选择,发酵液酸碱度的调节等。用本发明培养基配方及所建立的发酵工艺进行DH5a- Vnm23-H1的发酵,具有菌体得率高、目标蛋白表达量高、时间短、成本低等特点。
主权项
权利要求书
1、一种生产抗癌药物工程菌的发酵方法,其特征是:
A.按配制10L发酵液,发酵培养基配方重量百分比如下:
酵母提取物(Yeast extract) 0.30~3.0
蛋白胨(Typtone) 0.30~3.0
氯化钠(Nacl) 0.50~1.5
葡萄糖(Glucose) 0.30~5.0
微量元素 适量
B.发酵工艺
(1)菌种的加入量
菌种的接种量为培养基溶液的5~15%,菌种的光密度为1~3;
(2)工程菌生长和诱导表达的时间及温度
工程菌发酵过程中,长菌温度为28~35℃,时间2~5小时,诱导表达的温
度为39~45℃,时间3~7小时;
(3)加糖时刻及方式选择
加糖方式采取慢速加糖方式,加糖量为100~350g,且在0.5~3小时加完;
(4)发酵液酸碱度调节
采用酸碱自动平衡调节pH值,使pH值维持在6.5~7.5之间;
(5)溶氧水平
通过通气量与转速自动调节溶氧,维持在40%以上水平。
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