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食鸟类、昆虫及鸟卵，偶尔也吃动物尸体，还时常爬到村庄里偷食家禽。雌性于6—7月的雨季产卵于岸边洞穴或树洞中，每窝产卵15—30枚，卵的大小为70×40毫米。孵化期为40—60天。
巨蜥在遇到敌害时有许多不同的表现，如立刻爬到树上，用爪子抓树，发出噪声威吓对方；一边鼓起脖子，使身体变的粗壮，一边发出嘶嘶的声音，吐出长长的舌头，恐吓对方；把吞吃不久的食物喷射出来引诱对方，自己乘机逃走等等。但更多的时候，是与对方进行搏斗。通常将身体向后，面对敌人，摆出一副格斗的架势，用尖锐的牙和爪进行攻击，在相持一段时间后，就慢慢地靠近对方，把身体抬起，出其不意地甩出那长而有力的尾巴，如同钢鞭一样向对方抽打过去，使其惊慌失措而狼狈逃窜，甚至丧身于巨蜥的尾下。如果对方过于强大，它就爬到水中躲避，能在水面上停留很长时间，所以在云南西双版纳，当地的傣族同胞都叫它“水蛤蚧”。
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