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以原代培养的小鼠胎儿细胞为材料，学习动物细胞培养中最常用的消化法进行细胞传代培养的实验过程，为细胞纯化、冷冻保存、生长曲线的测定和细胞活性检查等实验奠定基础，并进一步练习无菌操作技术。
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
***材料：80%或接近汇合的小鼠胎儿细胞（或Hela细胞）1-2瓶
***试剂：含血清的Hank’s液100ml，0.25％胰酶+0.02%EDTA消化液20ml，DMEM+10%胎牛血清+抗生素培养液50ml
***仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸、25ml卡式培养瓶等
1、取80%或接近汇合的培养细胞，使培养瓶的细胞面向上，将培养液倒入污物缸内（或用吸管吸出培养液），用约2mlHank’S液清洗1次。
2、向培养瓶内加入胰酶和EDTA混合溶液约2ml。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10ml培养液终止消化。
观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟。
4、用去除消化液，向瓶内加入Hank’s液约3ml，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉；注意加Hank’s液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉。
5、 加培养液约5ml，用吸管吸取培养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使贴壁的细胞吹打成悬液，吹打勿用力过猛，以免伤害细胞。
6、把细胞悬液分成等份接种于4个培养瓶中，各瓶加培养液至3ml，置培养箱下继续培养。此后每3天换液1次，观察细胞传代培养后的形态变化。
初代培养的首次传代是很重要的，是建立细胞系的关键时期。首次传代时一般要注意以下几点：
1. 细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前，不要急于传代。把握好传代的时机，在细胞生长到80%-90%汇合时传代最好，过早传代细胞产量少，过晚传代细胞健康状态不佳。
2．原代培养时细胞多为混杂生长，上皮样细胞和成纤维样细胞并存的情况很多见，传代时不同的细胞有不同的消化时间，因而要根据需要注意观察及时处理，并可根据不同细胞对胰蛋白酶的不同耐受时间而分离和纯化所需要的细胞。另外，早期传代的培养细胞较已经建立细胞系的培养细胞消化时间相对较长。吹打细胞时动作要轻巧尽可能减少对细胞的损伤。
3．各种细胞对消化的反应不同，有的敏感，有的迟钝，因此应根据所用细胞特点制定适宜的消化措施。有的细胞附着瓶壁不牢，用吸管可从瓶壁上直接吹下来，但这样容易伤害细胞，细胞大片脱落，不易计数，因此，应尽可能采用消化法分散细胞为妥。消化传代良好时，细胞受损害少，细胞悬液均匀，各分装样品中数量误差小，细胞生长增殖速度一致，实验结果可靠性大。
4．消化液浓度要适宜，过浓时消化作用强烈，细胞反应快，所需消化时间短，掌握不好，细胞易流失。用胰蛋白酶与EDTA的混合液进行细胞消化时，要用Hanks充分洗涤细胞以去除EDTA，因为EDTA的残留会影响细胞的贴壁生长。
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1．裸眼观察细胞消化时培养瓶底部的变化，并与显微镜下细胞的变化相比较，分析出现这种变化的原因。
2．观察传代培养后不同时间细胞形态变化，与原代培养细胞进行比较。
1．消化细胞的目的是什么?
2．细胞传代培养和细胞分裂之间有何联系?细胞传代培养1次是细胞分裂1次吗?
附：消化液配制方法：
称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
胰酶溶液中也可加入EDTA，使最终浓度达0.02％。
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