学习研究细胞凝集反应的方法,了解细胞发生凝集反应的原因
凝集素是一类含糖、并能与糖专一结合的蛋白质,被认为与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。凝集素使细胞凝集是因为它与细胞表面的糖分子连接,在细胞间形成“桥”的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生凝集。 大多数凝集素存在于储藏器官中,作为一种氮源;对某些植物而言,受到危害时,凝集素作为一种防御蛋白发挥作用。凝集素与糖结合的活性及专一性决定其功能。
***材料: 马铃薯块茎,韭菜叶片
***试剂:
(1)磷酸缓冲液:分别称取氯化钠7.2g和磷酸氢二钠1.48g用蒸馏水溶解,混合后用蒸馏水定容至1000ml,调pH值至7.2。
(2) 2%兔血细胞:以无菌方法抽取兔的静脉血液(加肝素抗凝剂)用生理盐水洗5次,每次2000r/min离心5min,最后按红细胞体积加生理盐水配成2%兔血细胞液。
(3)生理盐水。
***仪器:捣碎机,离心管 ,离心机,载玻片,光学显微镜。
1.马铃薯块茎: (1)提取凝集素:称取马铃薯去皮块茎4g,加少许磷酸缓冲液研磨成匀浆,最终加到30ml磷酸缓冲液,浸泡2h,浸出的粗提液中含有可溶性马铃薯凝集素。 (2) 测定血凝活性:用滴管吸取马铃薯凝集素粗提液和2%兔血细胞液各一滴,置载玻片上,充分混匀,静置10 min后于低倍显微镜下观察细胞凝集现象。
2.韭菜叶片: (1)取韭菜叶片3~5g用蒸馏水洗净剪碎,按1:1(W/V)加入生理盐水,用捣碎机或研磨成匀浆,过滤,滤液在5000r/min下离心20 min,弃沉淀,留上清液。 (2)上清液加硫酸胺(约1.8 g)至60%饱和度沉淀, 5000r/min下离心20 min,沉淀用1ml磷酸缓冲液溶解。 (3)用滴管吸取韭菜凝集素提取液和2%兔血细胞液各一滴, 置载玻片上,充分混匀,静置10 min后于光学显微镜下观察细胞凝集现象。用一滴磷酸缓冲液和一滴2%兔血细胞液混合作为对照观察。
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兔红细胞凝集
1.绘图表示血细胞凝集现象,并说明原因。
2.比较马铃薯和韭菜凝集素的凝集效果。(可用凝集率、细胞产生凝集所需时间作为比较依据)
1.植物细胞凝集素在兔红细胞液凝集过程中起的作用? 2.哪些因素影响细胞凝集反应?
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