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人类基因组大规模测序已经基本完成。但破解基因组的序列只是一个起点,目前多数基因的功能还不清楚,因此基因功能的研究是今后 的发展趋势。传统研究基因功能的最有效技术之一是细胞和小鼠的基因敲除技术。但该技术存在技术复杂、周期长、费用昂贵等缺点,极大地 限制了它的应用。应用物理和化学突变技术可以诱导基因的随机突变,导致细胞或动物表型的缺陷,直接进行基因功能的筛选。但由于该方法 通常需要两个等位基因同时突变才会出现明显的表型,成功的机会比较低。而RNA干扰(RNA interference,RNAi)文库有希望成为一种简单、高 效、大规模、高通量的功能基因组学研究的工具。1 RNAi及RNAi文库 RNAi是近年来的重大发现,是动物和植物界普遍存在的一种防御反应。RNAi被细胞内出现的双链RNA(dsRNA)所激活,可以高度特异地抑 制同源基因的表达。根据目前的研究,RNAi的可能机制如下:长片段dsRNA在细胞内被Ⅲ型RNA酶Dicer切成长度大约为19~23 nt的小片段干扰 RNA(small interfering RNA,siRNA),由siRNA参与构成复合物RISC(RNA-induced silence complex)。 siRNA通过与同源mRNA的特异配对,引 导RIS < 1 > < 2 >
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