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准确、快速、高效——通过RNA干扰去除靶标基因的表达 |
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准确、快速、高效 ——通过RNA干扰去除靶标基因的表达 RNA干扰(RNA interference or RNAi)是一个自然存在的以双链RNA为中介降解具有相同序列RNA的机制。与其相关的过程存在于几乎所有已经检验过的真核细胞内。RNAi迅速成为一个研究基因功能、进行药物筛选的日益重要的手段。在哺乳细胞中,须利用短约21碱基的双链RNA(siRNA)来获得对目的基因的特异性干扰。为获得有效、特异性的RNA干扰,siRNA的设计、制造必须尽可能准确无误。 用于siRNA的RNA试剂: 化学合成的siRNA:不需要使用者做准备,但成本高,价格贵,相对不稳定。 转录产生的siRNA:使用原核RNA聚合酶进行试管转录产生,须多步酶反应、提纯。 从长双链RNA经酶切产生的siRNA:以靶标基因的cDNA为模板进行试管转录产生正义及反义RNA,退火,再利用RNaseIII将其切割成短双链RNA。比经转录产生siRNA省时间,但有更大可能引起非特意性RNAi。 用于siRNA的DNA试剂: < 1 > < 2 >
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