用RNA干扰来实现小鼠种系细胞基因敲除

[AD340X300]短发夹RNA-Short hairpin RNAs (shRNAs)是设计为能够形成发夹结构的非编码小RNA分子，短发夹RNA能够通过RNA干扰来抑制基因的表达。Thomas Rosenquist’s group和Greg Hannon’s group联合研究了在哺乳动物种系细胞中shRNAs的转移导致基因长时间稳定沉默的机制。Rosenquist and colleagues一开始希望用标准的转基因方法，用线性化片段注射入细胞核中产生转基因建成系而获得在种系细胞中能够转移基因沉默的小鼠品系，但是尝试不成功。他们接着选择了碱基切除修复有关的DNA N-糖基化酶-Neil1作为目标基因，用建立胚胎干细胞的方法来进行。研究者首先构建了一个针对抑制Neil1基因的shRNA表达载体，将此载体用电穿孔的方法注射入小鼠胚胎干细胞。稳定的胚胎干细胞系表现出Neil1蛋白80%的表达降低，这些细胞对离子辐射的敏感度上升了两倍，这与Neil1的功能丧失是一致的。研究者将两个独立的胚胎干细胞系注射到小鼠囊泡中，构建成为嵌合型小鼠。嵌合小鼠的几个F1子代中检测到了种系细胞传递的基因沉默。F1小鼠的几种组织中Neil1蛋白水平和mRNA水平都发生了降低。研究者认为shRN
< 1 > < 2 >

设为首页 | 加入收藏 | 广告服务 | 友情链接 | 版权申明