DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化免疫球蛋白

(一)　原理　　DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85～7.5)，其余均属酸性蛋白。在PH7.2～7.4的环境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通过柱层析γ球蛋白便可在洗脱中先流出,而其他蛋白则被吸附在柱上,从而便可分离获得纯化的IgG。DEAE-sephadexA-50柱层析是离子交换层析的一种。(二)试剂和器材　　1、试剂:　　(1)盐析提取的人γ球蛋白；　　(2)0.5N NaOH，0.5N HCl 2M NaCl，10％NaN3；　　(3)DEAE-Sephadex A-50，聚乙二醇(PEG)；　　(4)0.1M, PH7.4 PB(配制见盐析部分)；　　2、器材:　　(1)层析玻璃柱(1.3×40cm)，滴定铁架，自由夹，螺旋夹，尼龙纱(200目)；　　(2)普通冰箱，751桮型紫外分光光度计，电导仪、抽滤装置(包括抽气机、干燥瓶、布氏漏斗、橡皮垫圈、抽滤瓶)，PH计；　　(3)透析袋、座标纸、滤纸、PH精密试纸；　　(4)量筒、烧杯、试管、吸管、滴管、灭菌小瓶等。(三) 操作步骤　　1、DEA
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