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Sepharose CL-4B亲和柱层析纯化IgG及IgG亚类 |
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(一) 原理 葡萄球菌A蛋白(SPA)具有与多种哺乳动物IgG分子Fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。利用改变PH及离子强度可洗脱结合于SPA-Sepharose CL-4B柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。(二) 操作步骤 用0.1M PH8.0 磷酸缓冲液浸泡SPA-Sepharose CL-4B凝胶，15min。按1g干胶200ml 上述缓冲液充分洗涤凝胶(用玻璃漏斗过滤或置烧杯中洗涤) ↓ 装柱后用0.1M PH8.0磷酸缓冲液平衡 ↓ 标本可用硫酸铵粗提物，先10,000g离心除去杂质，必要时用0.22μm滤膜过滤。 上样前用1M PH9.0 Tris液调整标本液PH至8.1或对平衡液透析过夜 ↓ 加样，一般按25～30mgIgG／g湿胶比例加样，室温作用15min,0.1M PH8.0磷酸缓冲 液充分淋洗至淋洗液OD值为<0.02。 ↓ 用不同PH的枸椽酸洗脱液洗脱，流速20ml／h。如纯化小鼠IgG1一般用PH6.0；纯化 IgG2a用PH4.0；纯化IgG2b用0.1M PH3.0醋酸盐缓冲液或0.1M PH3.0 Glycine-HCl 缓
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