Sepharose CL-4B亲和柱层析纯化IgG及IgG亚类

缓冲液洗脱。　　　　　　　　　　　↓　　用PH3.0或4.0洗脱液洗脱时，用适量固体Tris直接中和含有IgG的洗脱液　　　　　　　　　　　↓　　收集洗脱液测OD值，根据实验需要透析除盐后进行浓度、纯度和活性测定(三)　试剂器材　　1.　SPA-Sepharose CL-4B(pharmacia)　　2.　磷酸缓冲液0.1M PH8.0＋0.02％ NaN３　　3.　枸椽酸缓冲液　0.1M PH6.0　┐　　　　　　　　　　　0.1M PH4.0　├＋0.02％ NaN3　　　　　　　　　　　0.1M PH3.0　┘　　4.　1M PH9.0 Tris溶液　　5.　再生缓冲液(1) 0.1M Tris含0.5M NaCl调正PH至8.5＋0.02％NaN3；(2) 0.1M醋酸钠含0.5M NaCl调正PH至4.5＋0.02％NaN3。　　6.　1～10ml柱体积的玻璃柱或塑料柱(四)　注意事项　　1.　SPA-Sepharose CL-4B凝胶价格昂贵，可再生后反复使用10～20次左右。方法:先用10倍柱体积0.1M PH8.5 Tris含0.5M NaCl溶液洗脱柱上的残存杂蛋白；再用10倍柱体积0.1M PH4.5醋酸钠缓冲液含0.5M NaCl液洗脱柱上残存的杂蛋白；0.1M PH8.0磷酸缓冲液平衡，4℃贮存。　　2.　SPA-Sepharose CL-4B亲和层析法还可用于:(1)除去抗体液中IgG，检测非IgG抗体(如IgM)的生物学活性；(2)除去木瓜蛋白酶或胃蛋白酶水解IgG后的Fc段； (3)回收或纯化免疫复合物。　　3.　狗、猫的多克隆IgM和IgA以及单克隆IgA和IgM也具有与SPA结合的能力。
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