从小鼠腹水中纯化McAb的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲和层析等。应用TSK DEAE-SPW离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化McAb不仅纯化速度快,回收率和得率高,而且保持良好的生物学活性。 (一) 原理 根据离子交换原理,将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样结合于层析柱上,通过增加洗脱液中的离子强度,洗脱并收集蛋白峰。(二)操作步骤 腹水10,000g离心10min,除去细胞和杂质,在4℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液, 使终浓度为40%饱和硫酸铵 ↓搅拌20~30min 离心,沉淀用40%饱和硫酸铵洗涤2次后溶于PBS,对缓冲液A(PH8.5 20mM Tris缓 冲液)透析除盐 ↓4℃过夜 用带有1000μl样品环的高压加样活门将透析后粗提物加样于经缓冲液A液平衡的 TSK DEAE SPW离子交换层析柱 ↓ 洗脱流速1ml/min 0~1min:0→5%缓冲液B(20mM Tris, PH8.5, 含2.0M醋酸钠) 1~20min(线性梯度洗脱):5→20%缓冲液B 20~22min:20→0%缓冲液B ↓ < 1 > < 2 >
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