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    重组蛋白纯化方法---细胞破碎

    研磨效果。  4)细菌磨 是一种改良了的研磨器,比研钵具有更大的研磨面积,而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。  2. 物理法   主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。在生化制备中常用的方法有:  1)反复冻溶法 先将样品深冷至-15---20度使之冻固,再缓慢的融化,反复多次,多用于动物性材料。  2)急热骤冷法 将材料投入沸水中,维持85-90分钟,至水浴中急速冷却,此法可用于细菌及病毒材料。  3)超声波处理 频率一般选在10KC至200KC,功率200-500瓦范围,处理时间有数分钟至数十分钟不等,处理过程中注意冷却。此法多用于微生物材料。   3.化学及生物化学法  有自溶法,酶解法和表面活性剂法等。  1)自溶法 在一定PH和适当的温度下,利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方法。此过程需较长时间,常用少量防腐剂如甲苯、氯仿等防止细胞的污染。  2)酶溶法 利用各种水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等,将细胞壁分解,使细胞内含物释放出来。有些细菌对溶菌酶不敏感,加入少量巯基试剂或8摩尔尿素处理后,使之转为对溶菌酶敏感而溶解。  3)表面活性剂处理 如十二烷基硫酸钠、氯化十二烷基吡啶等。
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