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    PCR技术(十二):PCR-SSCP的发展现状

    随着分子生物学技术的发展,检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后,各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage,RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)等等已成 为基因分析的有力工具.但这些方法操作比较繁琐,局限性较大,或要求实验条件 高,不适合一般临床实验室使用.1989年问世的PCR-SSCP(下文称SSCP)作为检测基因 突变的方法,经不断地改进和完善,更为简便、快速、灵敏,不但用于检测基因点突 变和短序列的缺失和插入,而且还被用于DNA定量分析,监测PCR诊断实验中的交叉污 染情况,以及传染源的调查等.由于SSCP的突出的优点,近几年被大量地应用.一、SSCP的原理及特点  日本Orita等研究发现,单链DN*段呈复杂的空间折叠构象,这种立体结构主要是由 其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的,当有一个碱基发生改变时,会或多或 少地影响其空间构象,使构象发生改变,空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰 胺凝胶中受排阻大小不同.因此,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),可以非常 敏锐地将构象上有差异的分子分离开.作者称该方法为单链构象
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