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凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种.一、琼脂糖凝胶电泳: 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和 鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度, 把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为62~65℃,溶解后在 37℃下维持液体状态约数小时,主要用于DN*段的回收,质粒与外源性DNA的快速连 接等.(一)凝胶浓度 凝胶浓度的选择依DNA分子的大小而定.琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度(%)线型DNA分子的分离范围(Kb)0.35~600.61~200.70.8~100.90.5~71.20.9~61.50.2~312.00.1~2(二)电泳缓冲液 核酸电泳缓冲液有三种,即Tris-硼酸(TBE)、Tris-乙酸(TAE)和Tris-磷酸(TPE).TBE 与TPE缓冲容量高,DNA分离效果好,但TPE在DN*段回收时含磷酸盐浓度高,容易使 DNA沉淀.TAE缓冲容量低,但价格较便宜,因而推荐选用TBE.缓冲液中的EDTA可螯合 二价阳离子,从而抑制DNA酶的活性,防止PCR扩增产物降解. 10XTBE缓冲液的配制 Tris硷,108克 EDTA,9.3克 硼酸,55克 H2O至,1000ul (其PH应为8.0~8.2) 临用时用水稀至0.5XTBE(20倍稀释.(三)核 < 1 > < 2 >
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