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    PCR技术(七):mRNA差异PCR技术

    生物界的丰富多彩很大程度上取决于严格调控下的基因的选择性表达。高等生物的细胞内约含有105个不同的基因,而主 基因在某个特定的细胞中,只有占15%的一小部分表达。而且在不同的细胞中,选择性表达的基础也是不同的。正是这些基因的选择不同决定了整个生命的过程:如细胞的生长分化,激素和细胞困子对细胞的作用、细胞周期的调控以及衰老、死亡等。和细胞的正常生理一样,一些病理的反应如肿瘤等也是由基因表达的改变引起的。所以,这种基因的选择性表达,是细胞生物学要研究的核心问题之一,而对于这一问题的研究方法也是分析生物发育和调控机制的一种重要方法。  以往,研究基因表达差异的主要方法是双向蛋白质电泳指纹图谱和依赖杂交的筛选技术。这两种技术各有自己的适用范围和优点。蛋白质指纹技术具有很高的灵敏度,可以很方便地区分出不同的表达产物,但往往得不到足够的量来分析和克隆它们的基因;而杂交技术则需要较长的周期和繁琐的步骤,也易发生基因的丢失。所以多年以来,人们一直想找出一种更方便有效的替代方法。  哈佛大学医学院的Peng Liang和Arthur B.Pardee博士发明的mRNA差别显示即DD法(differential display of mRNA by PCR), 是一种新的研究基因差异表达的有力工具。这个方法的离要程序是将细胞内的m RNA抽提出来,反复录成cDNA,尔后经PCR随机扩增, 通过
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