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    蛋白质的双向电泳实验方法

    第一向(等电点聚焦,IEF)1)凝胶条的准备1.以帽凝胶端(2个校准环:4mm和10mm)朝下,将4根玻璃管插入两个凝胶灌注装置的每个托架中,这样玻璃管恰好站在两个分隔室之一的“充填船”上。从玻璃管顶端到玻璃管底端拉入PP线(小心,线不易移动),否则以后将不能用它们将胶溶液拉上来。2.溶解分离胶溶液和过硫酸铵溶液。必须监控凝胶溶液的温度,因为高温下(大于25℃)聚合作用太快。3.分离胶溶液除气4分钟,在桌子边缘轻弹玻璃管壁,避免产生气泡。4.融化帽凝胶溶液,除气,步骤同3。5.用Gilson移液管加35μl APS到1365μl分离胶溶液中,溶液应小心摇晃,避免氧气进入胶内。6.将分离胶溶液加到两个凝胶灌注装置的每一个充填船里(每4个管700μl)。所有的玻璃管末端都必须浸没于凝胶溶液中。7.小心将PP线抽出,将凝胶溶液拉上至23mm的标记。8.换充填船分隔室。9.使用一个Gilson移液管,加10μl 0.8% APS到390μl帽凝胶溶液中,轻轻振荡使之混匀。10.  在两个凝胶灌注装置的每个充填船中的空余分隔室内加入200μl帽凝胶溶液;凝胶溶液应到达17mm的标记。11.  移去充填船,允许凝胶溶液到达13mm的标记。经过这一步,有空气进入管子底端和4mm标记处。12.  聚合30分钟后,将PP线抽出,去除凝胶表面未聚合的溶液。在毛细血
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