Western杂交

Western杂交l 组织印迹的Western杂交在硝酸纤维素膜上制备组织印迹1．在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸，在滤纸上方放上一张普通纸，然后铺上一层硝酸纤维素膜。2．用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片（厚度约为1mm）。如果组织表面是湿的，则在Kimwipes纸上轻轻吸干或用蒸馏水洗涤几秒钟然后再用Kimwipes纸吸干。用镊子将组织切片转移到硝酸纤维素膜上，注意一旦将切片放置在膜上以后就不得再移动切片。在切片上放置4层Kimwipes纸，用手指轻轻压15到20秒，用镊子小心拿开纸和组织切片。组织切片经甲苯酸蓝染色后观察其解剖结构。3．将留有组织印迹的硝酸纤维素膜在空气中晾干。4．将留有印迹的膜面向下，放入载玻片上的一滴甲苯酸蓝溶液中，对组织切片进行染色。2～3分钟后，吸干多余的染料，用间接照明立刻照相。将载玻片翻转，透过玻璃拍摄染色的组织切片。在切片上粘上几张纸片以免组织切片接触显微镜。用特定的抗体检测组织印迹中的蛋白质（室温下）1．在浅碟子里倒入30～40ml洗涤缓冲液I，清洗留有印迹的硝酸纤维素15分钟。洗涤缓冲液I：0.1mol/L Tris-HCl(pH8.0)0.05%叠氮化钠0.3％ Twen-202．将膜转移到15ml印迹缓冲液中，培育3小时。3．把膜转入10m
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