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ml用印迹缓冲液稀释的初级抗体溶液中，培育2小时。4．在40ml洗涤缓冲液I中清洗硝酸纤维素膜10分钟，换上新鲜缓冲液，重复清洗3次。5．将膜转入10ml用印迹缓冲液稀释的与碱性磷酸酶结合的二级抗体溶液中，培育1小时。6．在40ml洗涤液I中清洗硝酸纤维素膜10分钟。7．在40ml洗涤缓冲液Ⅱ中清洗硝酸纤维素膜15分钟，换上新鲜缓冲液，重复清洗1次。洗涤缓冲液Ⅱ：0.1 mol/L Tris-HCl(pH8.0)0.05%叠氮化钠0.3% Tween-200.05%十二烷基硫酸钠8．在40ml洗涤缓冲液I中清洗硝酸纤维素膜10分钟，然后用AP缓冲液平衡10分钟。AP缓冲液0.1 mol/L Tris-HCl (pH9.5)0.1 mol/L NaCl5 mmol/L MgCl29．在显色反应中，将膜放入10ml含有66μl氯化硝酸蓝四唑和33μl 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸的AP缓冲液中，两者均为碱性磷酸酶底物。目的蛋白所在处将出现紫色。通常显色10分钟即可获得满意的结果。如果需要更长时间的显色反应，必须在黑暗中进行。10． 在20ml洗涤缓冲液Ⅱ中清洗硝酸纤维素膜5分钟，终止显色反应。用40ml蒸馏水洗涤5分钟后在空气中晾干。11． 在解剖显微镜观察组织印迹中被染上色的蛋白质。利用透射光和入射光可成功的观察到蛋白质的定位模式。在入射光下可容易观察到物理印迹。为了确认组织印迹中的蛋白质定位，建议将染色的组织印迹和用甲苯酸蓝染色的组织切片进行直接比较。
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