RNA点杂交

RNA点杂交1）纯化的RNA的点杂交和狭线杂交安装印迹装置1．切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿，在20×SSC中室温泡1 h。2．在膜浸泡期间，先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置，再用无菌水洗干净。3．把两片厚滤纸用20×SSC浸湿，再放到真空器顶部。4．把样品槽插入装置的上部，把湿尼龙膜放在样品槽加样孔的底部，用吸管在膜的表面滚动以去除膜与装置夹层中的气泡。5．加紧夹板，连接真空管。6．加入10×SSC直至液面没过尼龙膜，关掉真空，再用10×SSC充满。 RNA样品准备1．把每个RNA样品（溶解在10μl水）分别与30μl RNA变性液混合。2．65℃温育5 min，然后在冰上冷却。3．向每个样品中加入等体积20×SSC。4．轻轻向印迹装置中吸入10×SSC，直到淹没尼龙膜。 RNA样品的印迹和RNA在膜上的固定1．把所有样品轻轻加入狭线中，然后轻轻吸干膜。当所有样品都铺到膜上后，每个狭线用1 ml 10×SSC洗两次。2．当第二次洗膜完成后，继续轻轻吸干膜。3．取下膜，用紫外交联、烘烤或微波照射把RNA固定在膜上。固定化RNA的杂交与洗膜1．把膜放入烤盘或杂交炉中，加入10~20 ml预杂交液68℃温育2 h。2．把已变性的放射性标记的探针直接加到预杂交液中。在适当的温
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