RNA点杂交

温度下继续温育12～16 h。3．杂交完后从塑料袋中取出膜，然后尽可能快地把膜转移到室温下装有100～200 ml、1×SSC（0.1% SDS）的塑料容器中。盖紧塑料容器，放到摇床上轻摇10 min。4．把膜转移到另一个装有100～200 ml、预热到68℃的0.5×SSC（含0.1% SDS）的塑料袋中，然后在此温度下轻摇10 min。5．按步骤17重复洗膜两次，使总的洗膜次数达到三次。6．用滤纸吸干膜，在-70℃条件下放射自显影24～48 h（Kodak XAR-5 或相当的胶片）。钨酸盐型的增感屏比旧式稀土型的效果更好。当然，磷光成像仪也可以用来成像。 2）RNA斑点印迹的制备（详见《分子医学技术》106页）1．裁一张大小合适的滤膜，用软铅笔标记RNA加样的位置，一个cm的方格即可。2．以20×SSC浸泡滤膜。3．在65℃用以下溶液温育5min，使10～20μg的总RNA变性。总RNA（10～20μg）2.0μl变性液6.0μl 置冰浴快速冷却5min，用微量离心管离心片刻以回收液滴，将管置于冰浴。4．将滤膜铺在一叠经20×SSC浸泡过的滤纸（如Whatman 3MM）上。5．在膜上点样，每孔4μl RNA，待一孔干燥后再加另一孔。6．将滤膜置滤纸（3MM）上稍微晾干，用20×SSC漂洗片刻。7．当滤膜仍潮湿时，将滤膜RNA面朝下在紫外线透照仪照射3～5min，使RNA固定于滤膜上，此滤膜已可用于杂交。
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