RNA印迹杂交

RNA印迹杂交1） Northern印迹的制备预备：1．按下述步骤，每泳道加10～20μg总RNA或0.5～1μg poly(A)+RNA进行甲醛/琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。a. 总RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃温育5min：总RNA（10～20μg）6.0μl甲酰胺12.5μl10×MOPS缓冲液2.5μl甲醛溶液（37％）4.0μlb. 置冰浴迅速冷却，加2.5μl上样缓冲液，并加样于按如下配制的甲醛/琼脂糖凝胶中。琼脂糖1.0g10×MOPS缓冲液10.0mlH2O73.0mlc. 加热至100℃溶解凝胶，然后置50℃水浴箱降温。加17ml甲醛，混匀并立即倒胶。须在通风橱内带手套操作，用一电泳槽专供RNA电泳。 Northern印迹1．当凝胶仍在电泳时，裁一张与凝胶大小相同的滤纸，以20×SSC浸泡。2．安装转移装置，盘内倒入杂交缓冲液（20×SSC）。在缓冲液平面上做一平台，将凝胶盘倒置，并盖三张经20×SSC饱和的滤纸（Whatman 3MM），平台两端的滤纸应浸入缓冲液中，用10ml的玻璃吸管滚动以赶除气泡并将滤纸推平。3．在滤纸表面倒入数ml 20×SSC，将凝胶倒扣于滤纸上，小心赶除凝胶与滤纸间的气泡，
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