组织印迹的Northern杂交

组织印迹的Northern杂交1）硝酸纤维素膜或尼龙膜上的组织印迹1．在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸，在滤纸上方放上一张普通纸，然后铺上一层尼龙膜。2．用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片（厚度约为1mm）。如果组织表面是湿的，则在Kimwipes纸上轻轻吸干或先用蒸馏水洗涤几秒钟然后再用Kimwipes纸吸干。用镊子将组织切片转移到硝酸纤维素膜上，注意一旦将切片放置在膜上就不得再移动切片。在切片上放置4层Kimwipes纸，用手指轻压15～20秒，用镊子小心拿开纸和组织切片。组织切片经甲苯酸蓝染色后观察其解剖结果。3．80℃真空烘烤留有组织印迹的尼龙膜2小时或用UV cross-linker在紫外光下照射尼龙膜。4．将留有印迹的膜面向下，放入载玻片上的一滴甲苯酸蓝溶液中，对组织切片进行染色。2～3分钟后，吸干多余的染料，用间接照明立刻照相。将载玻片翻转，透过玻璃拍摄被染色的组织切片。在切片上粘上几张纸片以免组织切片接触显微镜。 2）用35S－标记的RNA探针检测植物印迹中的mRNA1．在Seal-A-MealTM塑料带中倒入30～40ml洗涤溶液I，65℃清洗留有印迹的尼龙膜4小时。2．将膜放入20ml杂交溶液中，68℃预杂交4小时。3．将膜和用35S-标记的RNA放入10ml杂交溶液中，68℃杂交20小时。4．在100ml洗涤溶液Ⅱ中42℃
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