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    组织印迹的Northern杂交

    ℃清洗尼龙膜20分钟,换上新鲜洗涤溶液,重复清洗2次。5.用100ml洗涤溶液Ⅲ在适当的温度下(60~68℃)。用手提式微型检测器监控尼龙膜上剩余的放射性。清洗完毕后,有义RNA探针杂交的膜不再有放射性信号,但用反义RNA探针杂交的尼龙膜一般具有可检测的放射性信号。该信号的强度依赖于目的RNA的丰度。室温下用0.2×SSC对尼龙膜进行简单清洗,在空气中晾干。洗涤缓冲液Ⅲ:0.1 mol/L Tris-HCl(pH8.0)1 mmol/L EDTA6.将膜暴露在X-射线胶卷或Kodak T-max 400胶卷下进行放射自显影。用水平力如一小叠书使膜和胶卷保持良好的接触。一般来说,利用T-max 400胶卷比X-射线胶卷具有更高的分辨率。放射自显影的时间依赖于放射性信号的强弱,通常从4小时到4天。7.在X-射线处理器中对X-射线胶卷显影。把T-max400胶卷浸入Kodak T-max显影液I中显影1分钟,将底片转移到显影终止盘中30秒后浸入Kodak快速定影液中5分钟,然后用蒸馏水洗涤5分钟。8.在解剖显微镜下观察组织印迹中mRNA的位置。用Kodak Technical Pan Film 2415胶卷拍摄mRNA的定位模式,然后和用苯甲酸蓝染色的组织切片解剖结果比较。
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