Northern杂交

Northern杂交1．在10~20 ml 预杂交液中68℃温育膜2h。2．若使用双链探针，在100℃下加热32P标记的双链DNA 5 min，使之变性，然后迅速移至冰水中冷却。3．把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中，在合适的温度下继续温育12~16h。4．杂交后，将膜从塑料袋中取出，在室温下迅速转移到含有100~200ml 1×SSC，0.1%SDS的塑料盒内，将盒盖好，置于水平振荡器上，温和振荡10 min。5．将膜转移至另一含有100~200ml预热至68℃、含0.1%SDS的0.5×SSC的塑料盒中。68℃下温和振荡10min。6．重复步骤5，再洗涤至少2次，使68℃下共洗涤3次。7．在印迹纸上晾干膜，然后让膜于-70℃下在含增感屏的暗盒内对X线片（Kodar XAR-5或相应的胶片）放射自显影24~48h。此外，也可通过磷图像系统扫描得到膜上的图像。
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