基因组DNA Southern杂交

基因组DNA Southern杂交1）基因组DNA Southern印迹的制备预备1．用适当的限制性内切酶消化基因组DNA样品（10μg）。2．进行琼脂糖凝胶电泳。一般用0.7～1.0％的琼脂糖凝胶分离基因组DNA，它在1～15kb的范围内有较好的分辨率，可选用TBE或TAE缓冲液。琼脂糖凝胶电泳需在1V/cm的电压下进行，如果要分离片段大小相似的DNA带，应用较大的凝胶（20×25cm）。常用的标准品是由Hind Ⅲ消化的λDNA、Hae Ⅲ消化的ΦX174 DNA和100或1000bp的梯形图谱。电泳完毕，将凝胶放在紫外透射仪上，并在凝胶旁放一尺子进行拍照。当把凝胶从盘内移动紫外透射仪时，小心不要将凝胶滑落或弄破。 Southern印迹的制备1．将凝胶转移至塑料盒内。2．加入至少4倍凝胶体积的0.25mol/L HCl使DNA脱嘌呤，置室温摇床温育15min。这时凝胶上样缓冲液中的溴酚蓝应变*，如果15min后仍呈蓝色，应再温育5min。3．小心地塑料盒内HCl弃去，用蒸馏水漂洗凝胶一次。4．加入至少4倍体积的变性缓冲液，置室温摇床温育20min。5．用新鲜缓冲液重复步骤4，小心弃去变性缓冲液，用蒸馏水稍加漂洗。6．加入至少4倍体积的中和反应缓冲液，置室温摇床温育15min。7．用新鲜缓冲液重复步骤6。8．当处理凝胶时，裁一张略大于凝胶的滤膜（硝酸纤维膜或尼
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