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放射性标记的探针与固定在膜上的核酸Southern杂交 |
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放射性标记的探针与固定在膜上的核酸Southern杂交1. 将含有靶DNA的膜漂浮在盛有6×SSC(或6×SSPE)的皿中直到膜自下面而上完全浸湿。将膜浸于溶液中2 min。2. 用下列方法之一进行预杂交在热密封的袋中进行的杂交a. 将膜塞入热密封袋中(如Sears Seal-A-Meal或相应设备),按每平方厘米0.2ml加入欲杂交液中。尽量将袋中的空气挤出。b. 用热封口机密封袋的开口端两次。轻轻挤压袋子以检测密封的强度及是否完整。将袋子放在适宜温度的水浴中(水性溶剂杂交液68℃;含有50%的甲酰胺的杂交液42℃;磷酸-SDS杂交液65℃) 杂交瓶中进行的杂交a. 轻轻的将湿润的膜卷成圆柱状与制造商提供的塑料网一起放入杂交瓶。按每平方厘米0.1ml加入预杂交液。将瓶盖拧紧。b. 将杂交管放入预先加热到适宜温度的杂交炉中(水性溶剂杂交液68℃;含有50%的甲酰胺的杂交液42℃;磷酸-SDS杂交液65℃)。 塑料容器中进行的杂交a. 将湿润的膜放在塑料(如Tupper < 1 > < 2 >
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