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sp; 0.2 pmol（3 kb质粒为400 ng）无RNA酶的水 加至6μl5 mmol/L rNTP溶液 2μl100 mmol/L DTT 2μl10×转录缓冲液 2μl2 mg/ml 牛血清白蛋白 1μl10 mCi/ml[[α-32P] rNTP 5μl（比活性400～3000 Ci/mmol）轻弹管外壁以使各组分混合。然后加入：胎盘RNA酶抑制剂（10单位） 1μl噬菌体依赖于DNA的RNA聚合酶（约10单位） 1μl轻敲管壁外侧使反应物混合，离心1~2s以使所有液体沉降到管底。37℃（T3和T7噬菌体依赖于DNA的RNA聚合酶）或40℃(SP6噬菌体依赖于DNA的RNA聚合酶)下温育反应物1~2h。5. （任选）如需全长转录物，可加入2μl 0.5 mmol/L rGTP, 在适宜聚合酶的温度下再温育60min。6. 加入1μl 1mg/ml无RNA酶的胰DNA酶I以终止体外转录反应。轻弹管外壁以混合各试剂。37℃温育反应混合物15min。7. 加入100μl无RNA酶的水，通过用酚：氯仿抽提纯化RNA。8. 将水相转移至一个新的微量离心管，用下列三种方法中的任一方法将放射性标记的RNA与不需要的小分子RNA和rNTP分开：用乙醇沉淀纯化RNA通过离心柱层析纯化RNA通过凝胶电泳纯化RNA
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