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nbsp; 加至50μl 5×随机引物缓冲液：250 mmol/L Tris (pH8.0)25 mmol/L MgCl2100 mmol/L NaCl10 mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）1 mol/L HEPES(用4mol/L NaOH调至pH6.6)1 mol/L DTT贮存于－20℃，临用前用水稀释，使用后弃去稀释的DTT4. 加入5单位（约1μl）的Klenow片段，轻弹管壁以混合各组分。以最大速度离心1～2s使所有液体沉降到管底。反应混合物室温下反应60min。5. 在反应液中加入10μl NA终止/贮存缓冲液，可根据需要进行以下步骤。NA终止/贮存缓冲液：50 mmol/L Tris-Cl(pH7.5)50 mmol/L NaCl5 mmol/L EDTA(pH8.0)0.5% (m/V) SDS贮存放射性标记的探针于-20℃以备杂交用。或通过离心柱层析分离放射性标记的探针与未结合的dNTP或以乙酸铵和乙醇选择性地沉淀放射性标记的DNA。如果＞50%的放射性dNTP已在反应中掺入，可不进行该步骤。 另法1．1.5ml微量离心管内依次加入：10～200ng模板DNA（溶于1～9μl水）灭菌双蒸水加至9μl2．离心管加热至100℃ 5min即置入冰浴，短暂离心。3．冰浴上依次加入：2μl 10×反应缓冲液1μl 0.5 mmol/L dATP（终浓度25μmol/L）1μl 0.5 mmol/L dGTP（终浓度25μmol/L）1μl 0.5 mmol/L dTTP（终浓度25μmol/L）5μl α－[32P] dCTP（终浓度0.83μmol/L）1μl大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow大片段（2U）4．37℃温育30min。5．当温育反应物时，同时制备Sephadex G-50自旋转，2000×g离心2 min。6．加入2μl 0.2mol/L EDTA（pH8.0）终止反应。反应混合液装样至自旋柱，2000×g离心4min。7．取1μl柱洗脱液用液闪仪计数。用于杂交实验前，应将探针加热至100℃ 5min使之变性，随即置入冰浴5min。
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