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1) Poligo(dT)-纤维素层析法提取poly(A)+RNA装柱与填柱1. 取oligo(dT)-纤维素0.5~1.0 g,用0.1 mol/L NaOH重悬。2. 用oligo(dT)-纤维素(0.5~1.0 ml柱体积)灌注DEPC处理过的一次性柱子(或塞以无菌玻璃毛的巴式滴管,300℃烘烤灭菌4 h)。用3倍柱体积DEPC处理过的水洗涤柱子。3. 用无菌的1×装柱缓冲液(用无菌的DEPC处理过的水稀释2×的贮存液)洗涤柱子,直到流出液的pH值<8.0。用pH试纸测试。4. 用双蒸灭菌的水溶解RNA,65℃,5 min处理溶液。将溶液快速冷却到室温,并加入1倍体积的2×装柱缓冲液。 柱上poly(A)+的恢复5. 将RNA溶液加到柱上,并立即用无菌的管子收集流出液。当所有的RNA溶液进入柱子时,用1倍体积的1×装柱缓冲液洗柱,继续收集流出液。6. &nbs < 1 > < 2 >
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