CDNA文库筛选

CDNA文库筛选（一）λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1．用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基（Y1088用于噬菌斑杂交，Y1090用于免疫筛选），于37℃振荡培养过夜。2．将过夜培养物以3000×g离心5min。3．分别用2ml λ-dil（10 mmol/L tris-Cl,pH7.5; 10 mmol/L MgSO4; 高压灭菌）重悬细胞沉淀。4．细胞悬液可用于4℃贮存至一周。预制噬菌体悬液铺平板以已知滴度（如，已知每ml噬菌体颗粒数）的cDNA文库或其他噬菌体悬液开始，用λ－dil稀释以达到所需每平板噬菌体数。每个90mm直径平皿5×103个噬菌体/100μl开始筛选。铺平板1．将所需数量的LB平板置42℃温箱预热。2．LB顶层琼脂（每平板最少2.5ml）用微波炉熔化，然后置49℃水浴中。3．为温箱内的每一个平板准备一个12ml带螺旋盖试管，于室温，放在合适的架子上。4．用移液器每管加100μlλ－dil稀释的宿主细胞悬液。5．每管加100μl稀释的噬菌体悬液与细菌于漩涡器上简短混合。6．含细菌和噬菌体（感染混合物）的试管于37℃温育25min，然后室温放置。7．用一支消毒的10ml[1] [2] [3] [4] [5] [6] [7]
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