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原核细胞l 用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建1. PCR修饰或限制性内切酶消化分离DN*段，片段5’端和3’端带有与IPTG诱导表达载体对应的限制酶位点。2. 含靶cDNA/基因的DN*段与表达载体连接。3. 重组质粒转化有lacIq 等位基因的大肠杆菌菌株。如果质粒本身有lacI基因，可以使用任何适当的大肠杆菌菌株。将转化体铺于含氨苄（50μg/ml）的LB平板，于37℃过夜培养。4. 通过菌落杂交和/或小量制备质粒的限制酶切分析、寡核苷酸杂交或序列分析筛选带有插入片段的转化体。 诱导靶蛋白表达的优化 许多研究表明细胞生长速率严重影响外源蛋白的表达，因此必须对接种菌量、诱导前细胞生长时间和诱导后细胞密度进行控制。生长过度或过速都会加重细菌合成系统的负担，导致形成包涵体。5. 对照菌和重组菌分别挑取1～2个菌落，接入1 ml含氨苄青霉素（
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