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p; 0.5 Weiss单位 5 mmol/L ATP 1.0μl H2O 补至8.5μl 30%PEG 8000 1~1.5μlb. D、E和F管中加入： 10×连接缓冲液 1.0μl 5 mmol/L ATP 1.0μl H2O 补至8.5μl 30%PEG 8000 1~1.5μl 不加DNA酶 6．连接反应体系置于16℃水浴温育过夜或20℃水浴温育4 h。7．用每份稀释的连接产物转化感受态大肠杆菌。转化时，应包括用标准方法制备的已知量的超螺旋质粒DNA作为对照，以检查转化效率。管号DNA连接酶（有/无）预期转化克隆数A载体1+~03B插入片段+0C载体1和插入片段+比F管高5倍D载体1-~0E载体2-比D管高50倍F载体和插入片段-比D管高50倍G环状质粒-2×1051 去磷酸化2 未去磷酸化3 如果出现来自去磷酸化的载体DNA自身连接产物的转化子，是由于用碱性磷酸酶处理时未能除尽5’端的磷酸基。
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