用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA

放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1．按照（三）中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DN*段的大小，200bp左右的片段需要4～5％的凝胶，小于100bp的片段应灌制6～8％的凝胶。 l DNA的标记1．用两种限制性内切酶从10μg质粒上将待测DN*段切下。注意务必使至少一种酶酶切后产生5’凸出末端。酶切体系终体积50μl，在适宜的酶反应缓冲液条件下反应1小时。2．向酶切反应混合液中加入[α－32P]dATP（约10μCi/μl）(若5’凸末端含T残基) 10μldCTP(2mmol/L)
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