|
|
|
|
|
|
|
|
p; 1μldGTP(2mmol/L) 1μldTTP(2mmol/L) 1μlDNA聚合酶（Klenow片段）（5单位/μl） 1μl室温温育反应体系30分钟。3．加入7μl 10×上样缓冲液终止反应。 l 标记探针的分离1．将反应混合物上样于非变性凝胶。2．10～15V/cm条件下，用0.5×TBE缓冲液电泳2～3小时。3．将玻璃板从电泳槽中取出，分开，并使凝胶粘附于其中任一块板上。用保鲜膜将凝胶覆盖起来。4．将凝胶室温下对X光片曝光1分钟。小心操作使得显像后的X光片与凝胶能以曝光时方位复原。5．用保鲜膜覆盖在放射性自显影照片上。再将带凝胶的玻璃板放在其上，以照片为模板，用刀片切下含标记DN-段的凝胶片。将该凝胶片切成小片（约1mm2）后，放入微量离心管中。6．向管中加入1ml洗脱缓冲液，37℃连续振荡，温育过夜。7．将洗脱液转入两个干净微量离心管中（每管500μl），然后各加入1ml 100％乙醇，－80℃放置10分钟。室温离心15分钟沉淀DNA。8．弃上清，用80％乙醇洗沉淀，室温离心5分钟，用长颈巴斯德吸管移去上清，再用真空离心蒸发浓缩器或干燥器干燥沉淀。9．用闪烁计数器测定样品中的契仑科夫辐射量。将沉淀溶于适量TE中使标记探针的浓度为约104cpm/μl。 [1] [2] 下一页
< 1 > < 2 >
|
|
|
|
|
设为首页 | 加入收藏 | 广告服务 | 友情链接 | 版权申明
Copyriht 2007 - 2008 © 科普之友 All right reserved |
