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g的DNA可得到满意的结果。DNA的量大于1ug不增加蛋白质的量。5)标准兔网织红细胞裂解物系统能代替TNT兔网织红细胞裂解物系统？不，两个系统的设计不同。如将提供的裂解物系统替换，则不能获得最佳结果。6)能用别的来源的RNA聚合酶代替系统中的酶吗？所用的替代酶的量是多少？每一个TNT兔网织红细胞裂解物系统中的组分作了不同的设计。各组分作了最优的配方，替换一个组分会降低得率。比如不能在一个给定的系统中用T7 RNA聚合酶替换SP6 RNA聚合酶。每一个系统的反应中，RNA聚合酶的量适当，用别的RNA聚合酶会导致得率低。7)用TNT偶联网织红细胞裂解物系统翻译的模板序列有何要求？插入片段必须克隆在一个SP6、T3、T7 RNA聚合酶启动子的下游，在合适的翻译读码框中还有一个ATG。其它一些序列会影响最终得率，如起始密码子前后序列效应， 5`和3`非翻译序列， 5`帽类似物。 ATP位于Kozak翻译起始共有序列的模板[Kozak M(1990)Nucleic Acids Research 18,2828]， 比不含这一共有序列的模板，翻译效率高。在编码区上游含有如EMCVmRNA的内核糖体进入位点，或3`末端含有poly(A)， 可增加翻译效率。加入m7G(5)ppp(5)G类似物会抑制TNT偶联网织红细胞裂解物的翻译，因为这一游离类似物和翻译起始因子结合。8)用一种RNA聚合酶的启动子所得的表达是否高于其它序列？在正对照中，模板是超螺旋，含SP6聚合酶启动子所得的蛋白质的含量2-3倍高于T3或T7 RNA聚合酶启动子。但这一结果不适用于所有模板。9)系统提供的正对照是什么？ 所得蛋白的大小是多少？TNT偶联网织红细胞裂解物系统的正对照，是一超螺旋的模板，编码荧光素酶，受适合的RNA聚合酶驱动。序列还含一段短的poly(A)片段。在SDS-PAGE胶上，正对照产生的荧光素酶的大小是62kDa。10)TNT偶联网织红细胞裂解物系统该使用线性或环型DNA？环型DNA和3种RNA聚合酶均能有效配套，线性DNA适用于T3、T7系统，用SP6 RNA聚合酶的翻译效率却大大降低。如用线性DNA（比如TNT T7快速偶联转录/翻译系统），应在RNA聚合酶启动子的上游有20bp的序列，以使启动子的结合有效。11)TNT偶联兔网织红细胞裂解物能否和犬的微粒体膜一同用于翻译后修饰？是的，TNT偶联兔网织红细胞裂解物能和犬的微粒体膜一同使用，作翻译后修饰，但产物的得率降低50-80%。12)用TNT偶联兔网织红细胞裂解物能得到的最大的蛋白质是多少？研究人员成功报道用TNT偶联兔网织红细胞裂解物能得到的最大的蛋白质是176kDa的蛋白质。
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