HLA基因分型方法：PCR－SSO（ASO）探针法

PCR－SSO（ASO）探针法1）常规提取DNA参见RFLP法 2）PCR扩增参见PCR-RFLP法 3）斑点杂交1．将5～20μl扩增产物，加变性液100～200μl室温处理5～15min。2．在尼龙滤膜（预先用2×SSC浸湿2min）上真空点样，每孔以10×SSPE 200μl冲洗，抽干，80℃干燥2h。3．标记探针，取标记缓冲液2.5μl，寡核苷酸片段（dCTP, dGTP, dTTP）50～100ng，[γ-32P]ATP 2.5μl，T4多核苷酸酶10U，双蒸水加至25μl，混匀，37℃保温45min，用0.5mol/L EDTA 1μl终止反应，标记的探针可直接使用或采用柱层析分离标记好的探针。4．点样膜于杂交前漂洗，放入杂交袋中，加入适量预杂交液2ml/10cm2在杂交温度下预杂交10～60min，将适量标记探针加入预杂交液中，杂交1h～过夜。5．洗膜，2×SSPE和0.1％SDS[1] [2] 下一页
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