DN-段回收与纯化-实验方法

实验频道正文用户登录新用户注册 DN-段回收与纯化作者：佚名实验频道来源：生物谷点击数：更新时间：2004-6-18 质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。一、冻融法1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于1.5ml离心管中；2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚（pH 7.6），振荡混匀；3. -20℃放置5-10min；4. 4℃离心10000g×5min，上层液转移置另一离心管中；5. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管中，振荡混匀；6. -20℃，放置5-10min；7. 4℃离心10000g×5min，合并上清液；8. 用等体积酚/氯仿、氯仿分别抽提一次，取上清；9. 加入1/10体积3M NaAc（pH 5.2）、2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀；10. -20℃，静置30min；11. 4℃离心13000g×10min，弃上清，75%乙醇洗沉淀1-2次，晾干；12. 加适量H2O或TE溶解沉淀。二、DNA回收试剂盒（QIAquick Gel Extraction Kit Protocol）1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的凝胶，置1.5ml离心管中，称重。2. 加入Buffer QG（每100mg凝胶加Buffer QG 300μl），置50℃水浴10min。3. 若回收片段小于500bp或大于4kb，则需加入异丙醇（每100mg凝胶加异丙醇100μl），混匀。4. 将小柱放在2ml收集管上，将上述溶液加于柱上。5. 4℃离心13000g×1min，弃去收集管中液体。6. 加入500μl Buffer QG于柱上，4℃离心13000g×1min，弃去收集管中液体。7. 加入750μl Buffer PE于柱上，4℃离心13000g×1min，弃去收集管中液体。8. 4℃离心13000g×1min。弃去收集管。9. 将柱放于一新1.5ml离心管上，加50μl EB于柱上。放置1min，4℃离心13000g×1min。10. 取5μl 回收DNA电泳检测。三、注意事项紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。处理 SSI 文件时出错处理 SSI 文件时出错【评论】【进论坛看】【转入博客】实验频道录入：生物编辑责任编辑：生物编辑上一篇实验频道： DNA分子的限制性内切酶消化下一篇实验频道：目的基因的亚克隆【发表评论】【加入收藏】【告诉好友】【打印此文】【关闭窗口】相关文章最新热门推荐文章免疫组化染色过程中存在的问常用核酸和氨基酸代码动物模型的设计原则和注意事PCR常见问题总汇如何确定RNA质量的经验谈PCR引物设计的11条黄金法则蛋白纯化经验指南TA克隆常见问题分析及其解决免疫组化实验过程中的要点和核酸的抽提---mRNA的分离技巧 · 免疫细胞表面抗原分子CD家族对照表· 所有的看家基因(housekeeping gene· 生物发光与化学发光专题· 生物发光和化学发光在生物技术中的· 重组DNA的分离、克隆与测序实验手册· RNAi和基因沉默的历史回顾· RNAi原理图解· RNAi术语表· siRNA设计指南· Methods for DNA sequencing · 通用电气医疗集团简介· 生物发光与化学发光专题· 生物发光和化学发光在生物技术中的· RNA干扰技术获得新突破· 蛋白质特性与分离纯化技术的选择· PCR实验指导与常见问题分析· RNAi原理FLASH演示· Extrachromosomal elements, plasm· Promoter analysis by saturation · 重组DNA的分离、克隆与测序实验手册文章评论（只显示最新10条。评论内容只代表网友观点，与本站立场无关！）生物谷 | 网站介绍 | 网站地图 | 广告服务 | 帮助关于我们 | 广告服务 | 战略伙伴 | 留言| 帮助信息| 联系方式 | 客户投诉 | 友情链接 | 网站地图 | 网站声明 | Bioon English 上海北岸信息技术有限公司公司地址：上海龙吴路51号嘉源商务中心1#211室(200232) 生物谷网站 bioon.com © Copyright 2001 - 2006. All rights reserved. 备案号：沪ICP备05022939号
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