|
|
|
|
|
|
|
|
实验频道正文 用户登录 新用户注册 表达蛋白的生物学活性的检测 作者：佚名 实验频道来源：生物谷 点击数： 更新时间：2004-6-18 一、MTT比色法检测细胞活性（一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中, 抽滤除菌。2、 L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g碳酸氢钠，10ml 100X青链霉素，5mlHEPES。3、 MTT液：5mg/ml溶于L15基础培养基。4、 SDS处理液：20gSDS，50μl二甲基甲酰胺，加双蒸水50ml溶解。5、 L-多聚赖氨酸：50μg溶于1ml双蒸水中。6、 L15基础培养基溶解的不同浓度的蛋白液。（三）操作步骤（以背根神经节细胞培养为例）1、 无菌条件下取新生一天的SD大鼠背根神经节（DRG）。2、 镜下去除神经根和外膜，放入1ml 0.1%胶原酶中37℃消化30min，每5min摇匀一次。3、 洗去胶原酶，吹打分散后，接种于预先涂有L-多聚赖氨酸的96孔培养板中，每孔含100μl无血清L15培养基，细胞约800个。4、 实验组分别加入纯化的表达蛋白（分别以不同的蛋白浓度），阴性对照加入等体积表达蛋白的溶剂。5、 37℃ 5%CO2培养48hr后，每孔加入10μl MTT，37℃ 5%CO2孵育4hr。6、 加入100μl 20%的SDS处理液，37℃孵育20hr。7、 用EL×800微孔酶标仪测定OD570值，数据分析。 二、DRG无血清培养检测促神经生长作用（一） 操作步骤：1、无菌条件下取新生一天的SD大鼠DRG。2、镜下去除神经根和外膜，接种于预先涂有L-多聚赖氨酸的96孔培养板中，每孔1个DRG。3、待DRG贴壁后加入100μl无血清L15基础培养基，实验组加入纯化的表达蛋白（分别以不同的蛋白浓度），阴性对照加入等体积的溶解表达蛋白的溶剂。4、37℃ 5%CO2培养，每天在Olympus倒置显微镜下观察细胞的生长情况，并进行测量，其数据作统计分析。二、注意事项1、MTT有毒，注意防护。2、单个DRG贴壁实验操作难度较大，需仔细耐心。 处理 SSI 文件时出错 处理 SSI 文件时出错 【评论】【进论坛看】【转入博客】 实验频道录入：生物编辑 责任编辑：生物编辑 上一篇实验频道： 表达蛋白的分离与纯化 下一篇实验频道： 真核转染 【发表评论】【加入收藏】【告诉好友】【打印此文】【关闭窗口】 相关文章 最新热门 推荐文章 表达蛋白的分离与纯化表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝 · 免疫细胞表面抗原分子CD家族对照表· 所有的看家基因(housekeeping gene· 生物发光与化学发光专题· 生物发光和化学发光在生物技术中的· 重组DNA的分离、克隆与测序实验手册· RNAi和基因沉默的历史回顾· RNAi原理图解· RNAi术语表· siRNA设计指南· Methods for DNA sequencing · 通用电气医疗集团简介· 生物发光与化学发光专题· 生物发光和化学发光在生物技术中的· RNA干扰技术获得新突破· 蛋白质特性与分离纯化技术的选择· PCR实验指导与常见问题分析· RNAi原理FLASH演示· Extrachromosomal elements, plasm· Promoter analysis by saturation · 重组DNA的分离、克隆与测序实验手册 文章评论 （只显示最新10条。评论内容只代表网友观点，与本站立场无关！） 生物谷 | 网站介绍 | 网站地图 | 广告服务 | 帮助 关于我们 | 广告服务 | 战略伙伴 | 留言| 帮助信息| 联系方式 | 客户投诉 | 友情链接 | 网站地图 | 网站声明 | Bioon English 上海北岸信息技术有限公司 公司地址：上海龙吴路51号嘉源商务中心1#211室(200232) 生物谷网站 bioon.com © Copyright 2001 - 2006. All rights reserved. 备案号：沪ICP备05022939号
< 1 > < 2 >
|
|
|
|
|
设为首页 | 加入收藏 | 广告服务 | 友情链接 | 版权申明
Copyriht 2007 - 2008 © 科普之友 All right reserved |
