内切酶的热失活参数

热失活是终止酶切反应的一种简便易行的方法。大多数最适反应温度是37℃的酶在65℃下温育20分钟即可失活。一些在65℃下不能失活的酶如将温度升高至80℃，温育20分钟也可失活。下表注明了每种酶的失活条件。在50μl的反应体系中，37℃条件下，以0.5μg小牛胸腺DNA作为底物，加入5-10μl内切酶及相应缓冲液，反应60分钟，然后升温至65℃或80℃温育20分钟进行热失活。在上述混合液中加入0.5μg底物DNA（通常为λDNA），调节温度至最适反应温度，温育60分钟。若琼脂糖电泳显示底物部分或完全被消化，则表明该酶没有完全被热失活。EnzymeHeat Inactivation (temperature)Aat IIYes (65°C)Acc IYes (80°C)Acc65 IYes (65°C)Aci IYes (65°C)Acl INoAcu IYes (65°C)Afe IYes (65°C)Afl IIYes (65°C)Afl IIIYes (80°C)Age IYes (65°C)Ahd IYes (65°C)Ale IYes (65°C)Alu IYes (65°C)Alw IYes (65°C)AlwN IYes (65°C)Apa IYes (65°C)ApaL INoApeK INoApo IYes (80°C)Asc IYes (65°C)
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