分子生物学产品常见问题分析

分子生物学产品常见问题分析问题原因解决办法DNA完全没有被内切酶切割1) 内切酶失活标准底物检测酶活性2) DNA不纯，含有SDS，酚，EDTA等内切酶抑制因子将DNA过柱纯化，乙醇沉淀DNA3) 条件不适（试剂、温度）检查反应系统是否最佳4) DNA酶切位点上的碱基被甲基化换用对DNA甲基化不敏感的同裂酶酶解，重新将质粒DNA转化至dcm-，dam-基因型的细菌菌株5) DNA酶切位点上没有甲基化（如Dpn I）换用不同切割非甲基化位点的同裂酶消化DNA（如San3A I代替Dpn I)，重新将质粒转至dcm+ dam+菌株中扩增6) DNA位点上存在其它修饰将DNA底物与λDAN混匀进行切割验证7) DNA不存在该酶识别顺序换用其它的酶切割DNA或过量酶消化进行验证DNA切割不完全1) 内切酶活性下降用5-10倍量过量消化2) 内切酶稀释不正确用酶贮藏液或反应缓冲液稀释酶3) DNA不纯，反应条件不佳同上4) 内切酶识别的DNA位点上的碱基被甲基化或存在其它修饰同上5) 部分DNA溶液粘在管壁上反应前离心数秒6) 内切酶溶液粘度大，取样不准将内切酶稀释，增大取样体积7) 酶切后DNA粘末端退火电泳前将样品置65℃保温5-10分钟，取出后置冰浴骤冷8) 由于反应溶液、温度、强烈振荡使内切酶变性使用标准反应缓冲液及温度，避免强烈振荡9) 过度稀释使酶活性降低适当稀释酶液，反
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