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加压,让resin继续紧缩一下。随着柱面的下降,接头装置还得不断往下移动,使得接头刚刚好与柱面接触。接触不紧密的话,等于是冲淡了样品,分辨率会降低。 柱子装好了,但还不能开始跑样品。为什么呢?因为这种柱子的质量必须很好才能起到分离蛋白的效果,否则是根本没法work的。所以呢,首先得测试这个柱子是否真的装好了。测试过程很简单,就是跑一下蓝色葡聚糖(blue dextran),蓝色葡聚糖是带有蓝色染料的多糖高分子聚合体,体积非常大,所以在空体积(void volume)就会洗脱出来。跑蓝色葡聚糖可以起到三个目的。第一个就是确定void volume,知道这个空体积是很重要的。因为每次装柱子,实际resin的总体积都会有微小的不同。特定蛋白在柱子的洗脱体积与空体积的比值是一定的,所以只要知道了空体积,就能知道蛋白大概会在什么时候洗脱出来。第二个就是确定样品会被稀释多少。第三个呢,是柱子是否装的均匀。如果装的不均匀,葡聚糖j就会跑得形状怪异。一般来说呢,柱子下端堆积会比上端均匀,为了分辨度好,应该从更均匀的一端上样。所以我们在做的时候,是从下端上样的。 忙活了半天,当所有装置都装好的时候,感觉还是挺兴奋的。首先是蠕动泵,然后是柱子,然后是UV monitor加记录仪。整套装置不贵,功能却很齐全。 你还没注册?或者没有登录?
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