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外源基因(DN*段)很难直接透过受体细胞的细胞膜进入受体细胞,即使进入,也会受到细胞内限制性酶的作用而分解。要将外源DN*段导入受体细胞,必须选择适当的载体(Vector),这是关键步骤之一。 载体是携带外源基因进入受体细胞的工具。作为载体的DNA分子,需具备两项基本条件:①容易进入寄主细胞;②进入寄主细胞后能够独立进行自主的复制和表达;③容易从宿主细胞中分离纯化。 通常在基因工程中选作载体的有:①质粒——环状双链小型 DNA 分子,种类甚多,有的可在细菌细胞内独立复制,有的亦可用于动、植物细胞。 例如:根瘤土壤杆菌所携带的 Ti 质粒常用作植物细胞基因工程的载体。人工改造的质粒常用的有pBR322天然质粒,派生质粒pmB1,psC101等②噬菌体——常用的是λ噬菌体。经构建后,常用于细菌细胞。常见的有Mu噬菌体载体。③病毒——例如猿猴空泡病毒 SV40 常用作动物细胞基因工程的载体。 ④粘粒(cosmid,装配性质粒),由质粒和Mu噬菌体的cos位点u或膜等构建而成的一种大容量克隆载体。 含有目的基因的DN*段和载体DNA连接技术即DNA重组技术,其核心步骤是DN*段之间的体外连接,其本质是涉及限制酶,连接酶等酶促反应过程。载体为细菌中的质粒,温和噬菌体。重组DNA即载 < 1 > < 2 >
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