Sephadex LH20使用心得谈

，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。5 分离的技巧，最后说说我的使用心得（1）流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。（2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。（3）馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。（4）洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。（5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质（6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。（7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用问：在不同的溶剂中的吸涨程度是不是不同?那进行梯度洗脱会不会有影响.还有是不是样品的溶解是不是要与洗脱的起使浓度相同?如何确定样品在最佳配比的容液中溶呢?还有分到什么程度是用Sephadex LH20比较好? 解答如下:1 "在不同的溶剂中的吸涨程度是不是不同?那进行梯度洗脱会不会有影响."当然有影响,Sephadex LH20在不同的溶剂中的吸涨程度是不同的(任何填料都是这样,只是Sephadex LH20很明显),一般在丙酮，乙酸乙酯中收缩很厉害,所以一般不用丙酮，乙酸乙酯作溶剂,如果前后使用的两种洗脱溶剂对Sephadex LH20的吸涨程度相差很大,还会产生大量气泡.以下列举了1g干态的,Sephadex LH20对不同溶剂中的保留体积：water 2.1mlMeOH 1.9mlEtOH 1.8mlCHCl3 1.6mln-BuOH 1.6ml丙酮 0.8ml乙酸乙酯 0.4ml甲苯 0.2ml2 "还有是不是样品的溶解是不是要与洗脱的起使浓度相同?如何确定样品在最佳配比的容液中溶呢?"样品的溶解最好与洗脱的起使浓度相同，但有时（其实是多数情况下），都办不到。对Sephadex LH20上样样品的要求是1 样品一定要溶解（Sephadex LH20很贵，要保护填料，我看植化的同志对好填料看得都很重，职业问题，哈哈哈；同时，避免样品不溶解造成的脱尾）2 溶解样品的体积尽可能小（色谱分离理论的基本要求，减小原始谱带宽度）3 样品的溶解最好与洗脱的起使浓度相同（若样品的溶解溶剂比洗脱的起使浓度洗脱能力强，则会人为增加洗脱起使溶剂的洗脱能力；同时若样品的溶解溶剂与洗脱的起使溶剂差别很大，样品可能以为溶解性的问题而析出。）以上三点是上样的基本要求，有时很难求全，只有根据具体的实际来决定了。一般我的做法是满足1，2点，尽量满足第三点，“如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解”，请注意我的陈述“尽可能”，3 "还有分到什么程度是用Sephadex LH20比较好?"如果实验室Sephadex LH20很珍贵，分道较纯再用，如果实验室Sephadex LH20很普及，只要满足使用的注意事项，较粗的样品可直接使用Sephadex LH20分离。日本的师兄都是用Sephadex LH20粗分，人家有钱，所以不在乎。如果硅胶比Sephadex LH20还贵，你一定先用Sephadex LH20粗分，再用硅胶吧。有很多问题根本不是学术本身的问题，人也不可能在真空中搞科研。哈哈，跑题了。共3页: 上一页 1 [2] [3] 下一页
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