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浙贝片 为鳞茎外层的单瓣鳞叶切成的片。椭圆形或类圆形，直径 1 ～ 2cm ，边缘表面淡-，切面平坦，粉白色。质脆，易折断，断面粉白色，富粉性。 【鉴别】（ 1 ）本品粉末淡黄白色。淀粉粒甚多，单粒卵形、广卵形或椭圆形，直径 6 ～ 56μm ，层纹不明显。表皮细胞类多角形或长方形，垂周壁连珠状增厚；气孔少见，副卫细胞 4 ～ 5 个。草酸钙结晶少见，细小，多呈颗粒状，有的呈梭形、方形或细杆状。导管多为螺纹，直径至 18μm 。 （ 2 ） 取本品粉末 5g ，加浓氨试液 2ml 与三氯甲烷 20ml ，放置过夜，滤过，取滤液 8ml ，蒸干，残渣加三氯甲烷 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每 1ml 各含 2mg 的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 Ⅵ B ）试验，吸取上述供试品溶液 10 ～ 20μl 、对照品溶液 10μl ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以乙酸乙酯 - 甲醇 - 浓氨试液（ 17:2:1 ）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 【检查】水分 照水分测定法（附录 Ⅸ H 第一法）测定，不得过 18.0% 。 总灰分 不得过 6.0% （附录 Ⅸ K ）。 酸不溶性灰分 不得过 1.0% （附录 Ⅸ K ）。 【浸出物】 照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（附录 Ⅹ A ）测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于 8.0% 。 【含量测定】 照高效液相色谱法（附录 Ⅵ D ）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈 - 水 - 二乙胺（ 70:30:0.03 ）为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论塔板数按贝母素甲峰计算应不低于 2 000 。 对照品溶液的制备 精密称取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品适量，加甲醇制成每 1 ml 含贝母素甲 0.2 mg 、贝母素乙 0.15 mg 的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛） 2g ，精密称定，置烧瓶中，加浓氨试液 4ml 浸润 1 小时，精密加入三氯甲烷 - 甲醇（ 4:1 ）的混合溶液 40ml ，称定重量，混匀，置 80℃ 水浴中加热回流 2 小时，放冷，再称定重量，加上述混合溶液补足减失重量，滤过，精密量取续滤液 10ml ，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至 2ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液 10μl 、 20μl ，供试品溶液 5 ～ 15μl ，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算贝母素甲、贝母素乙的含量，即得。 本品按干燥品计算，含贝母素甲（ C 27 H 45 NO 3 ）和贝母素乙（ C 27 H 43 NO 3 ）的总量不得少于 0.08% 。 【炮制】除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥；或打成碎块。 【性味与归经】苦，寒。归肺、心经。 【功能与主治】清热散结，化痰止咳，用于风热犯肺，痰火咳嗽，肺痈，乳痈，瘰疬，疮毒。 【用法与用量】 4.5 ～ 9g 。 【注意】不宜与乌头类药材同用。 【贮藏】置干燥处，防蛀。 二、浙贝母质量标准起草说明 （一）概述 浙贝母收载于《中国药典》（ 2000 年版），原标准中无定量方法，根据药典会有关文件的要求，对该品种质量标准进行提高。据文献报道，浙贝母主含甾醇类生物碱：贝母素甲（ peimine ，即浙贝母碱）、贝母素乙（ peiminine ，即去氢浙贝母碱）、浙贝宁（ zhebeinine ）、浙贝酮（ zhebeinone ）、贝母辛（ peimisine ）、异浙贝母碱（ isoverticine ）、浙贝母碱苷（ peiminoside ）、浙贝宁苷（ zhebeininoside ）、浙贝丙素（ zhebeirine ）等，故选定贝母素甲、贝母素乙作为浙贝母药材含量测定的指标。另对原粉末鉴别特征及薄层鉴别方法进行了修改，并增加了水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物等检查及测定项。经四川省药品检验所复核，增修订项目方法基本可行，重现性较好。 （二）质量标准起草说明 1. 来源 根据我所对浙江磐安县等生产地调查，浙贝母加工方法近年来多采用硫磺薰，而且是多次反复薰，已与传统用贝壳粉或石灰粉撞擦不同，考虑到硫磺薰后有残留，味酸易影响药材质量，故不予收入标准，而保留传统的加工方法。 2. 性状 《中国药典》（ 2000 年版）规定为味微苦，经实样比较，本品味苦同于湖北贝母，明显不同于川贝母之味微苦，认为改为味苦比较合适。 3. 鉴别 （ 1 ）浙贝母的显微鉴别：《中国药典》（ 2000 年版）中已有收载淀粉粒，但在实验过程中发现淀粉粒层纹不明显，气孔及草酸钙结晶均较少见，故建议将其修改为淀粉粒层纹不明显，气孔及草酸钙结晶少见，显微特征图见图 5-1 。 淀粉粒 草酸钙结晶 导管 表皮细胞及气孔 图 5-1 粉末显微特征图 （ 2 ）薄层色谱鉴别：原标准中收载了贝母素甲、贝母素乙的薄层色谱鉴别，在实验过程发现按原提取方法中采用苯作为提取溶剂，毒性很大，现改为三氯甲烷；另供试品溶液和对照品溶液的稀释溶剂由三氯甲烷改为挥发性较差的甲醇，结果斑点清晰，见下图 5-2 。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 图 5-2 浙贝母薄层照片 1 ～ 5 、 7 ～ 11 ：样品 6 ：贝母素甲、贝母素乙对照品 4. 检查 杂质 因本品杂质较少，认为不必将其列入标准。 水分 取本品，照水分测定法附录 Ⅸ H 第一法测定， 9 批药材测定结果见表 5-1 。根据测定结果，规定水分不得过 18.0% 。 总灰分 取本品，照附录 Ⅸ K 总灰分测定法测定， 9 批药材测定结果见表 5-1 ，根据测定结果，规定总灰分不得过 6.0% 。 酸不溶性灰分 取本品，照附录 Ⅸ K 的方法进行测定， 9 批药材测定结果见表 5-1 ，根据测定结果，规定酸不溶性灰分不得过 1.0% 。 5. 浸出物 照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（附录 Ⅹ A ）测定，用稀乙醇作溶剂，结果见表 5-1 ，根据测定结果，规定浸出物不得少于 8.0% 。 表 5-1 浙贝母检查项汇总表 编号 来源 水分 (%) 总灰分 (%) 酸不溶性灰分 (%) 浸出物 (%) 1 小浙贝（磐安） 13.2 3.2 0.2 11.8 2 浙贝（珠贝） 15.5 3.0 0.1 11.6 3 浙江省药检所留样 12.8 5.3 0.1 17.1 4 杭州中药饮片厂 17.4 2.6 0.2 10.2 5 浙江中药学院饮片厂 14.8 2.6 0.2 10.7 6 浙贝 ( 宁波 )1 14.0 3.2 0.2 11.6 7 浙贝（磐安立夏采收） 13.7 2.5 0.1 9.3 8 浙贝（亳州） 18.0 2.7 0.2 10.2 9 浙贝（宁波） 2 16.8 2.2 0.2 8.7 10 浙贝（天津） 15.0 / / / 11 浙贝（广州） 15.1 / / / 6. 含量测定 贝母素甲、贝母素乙为本品的主要有效成分，因此两种成分紫外区吸收值很小，故现应用反相高效液相色谱蒸发光散射检测法测定其含量，经方法学验证，精密度、重复性、回收率等均符合要求。 （ 1 ）仪器与试药 仪器与色谱条件（中国药科大学）： HP1100 高效液相色谱仪： Agilent G1312A 二元泵， Rheodyne7725i 手动进样阀， Chemstation6.01 色谱工作站， Agilent 359001 数模转换器；色谱柱： Agilent Hypersil BDS-C 18 (4.0×250mm ， 5μm) ；流动相：乙腈 - 水 - 二乙胺（ 70:30:0.03 ），流速 0.8ml/min ；检测器： Alltech 2000 蒸发光散射检测器（ ELSD ）；漂移管温度： 85℃ ；载气流速： 2.2L/min ；气源： WYK-2 型无音无油空压机（天津市蓝珂科技实业公司）。 仪器与色谱条件（浙江省药检所）： HP1100 系列高效液相色谱仪（ G1322A 脱气机、 G1313A 自动进样仪、 G1316A 柱温箱） Agilent 35900E 数模转换器；色谱柱： Agilent ZORBAX Extend-C 18 (4.6×250mm ， 5μm) ；流动相：乙腈 -0.1% 二乙胺溶液（ 70:30 ），流速 0.8ml/min ；检测器：蒸发光散射检测器；漂移管温度： 85℃ ，雾化气：氮气，流速 2.2L/min 。 贝母素甲、贝母素乙对照品由中国药科大学提供，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余为分析纯。 （ 2 ）条件的优化 以贝母素乙为考察对象，配制一较低浓度溶液，以信噪比（ S/N ）为指标，对 ELSD 条件进行优化。 优化漂移管温度 固定载气流速为 2.1l/min ，对漂移管温度进行优化。结果见表 5-2 和图 5-3 。 表 5-2 漂移管温度对 S/N 的影响结果 漂移管温度（ ℃ ） 80 82.5 85 90 95 S/N 5.6 7.2 7.5 6.2 5.3 优化载气流速：于最佳漂移管温度（ 85℃ ）处，对载气流速进行优化。结果见表 5-3 和图 5-4 。 表 5-3 载气流速对 S/N 的影响结果 载气流速（ L/min ） 2 2.1 2.2 2.3 2.4 S/N 7.1 8.5 11.2 7.9 7.2 图 5-3 漂移管温度对 S/N 的影响曲线图 图 5-4 载气流速对 S/N 的影响曲线图 结果表明，最佳 ELSD 条件为漂移管温度 85℃ ，载气流速 2.2l/min ，此时可以获得最佳的信噪比。 （ 3 ）提取条件的优化 以象贝（ 60 目， 60℃ 烘 2h ）进行考察。 提取溶剂的选择 采用氨水浸润 1h 后，冷浸过夜，超声提取 1h 的提取方法，对-、三氯甲烷、混合溶剂三氯甲烷 - 甲醇（ 4:1 ）和甲醇四种提取溶剂进行了比较优化。结果见表 5-4 。 表 5-4 四种提取溶剂提取浙贝母药材（象贝）效果比较 提取溶剂 贝母素甲（ %? ） 贝母素乙（ %? ） - 三氯甲烷 三氯甲烷 - 甲醇（ 4:1 ） 甲醇 0.0384±0.0006 0.0465±0.0005 0.0622±0.0003 0.0419±0.0002 0.0344±0.0001 0.0327±0.0002 0.0489±0.0002 0.0378±0.0001 结果表明，-提取杂质最少，但含量稍低；三氯甲烷 - 甲醇提取含量最高，但杂质稍多；三氯甲烷提取含量低；甲醇提取不仅含量低，而且杂质很多。因此考虑用-和三氯甲烷 - 甲醇作进一步的考察。 提取方式的选择 对-索氏提取，-加热回流（ 80℃ ） 4h ，三氯甲烷 - 甲醇（ 4:1 ）加热回流 4h 进行了考察。结果见表 5-5 。 表 5-5 不同提取方式提取效果比较 提取方式 贝母素甲（ % ） 贝母素乙（ % ） -索氏 -回流（ 4h ） 三氯甲烷 - 甲醇（ 4:1 ）回流（ 4h ） 0.0616±0.0010 0.0505±0.0010 0.0730±0.0004 0.0532±0.0007 0.0443±0.0012 0.0613±0.0018 结果表明，三氯甲烷 - 甲醇（ 4:1 ）回流提取最完全。 提取时间的选择 采用三氯甲烷 - 甲醇（ 4:1 ）加热回流（ 80℃ ），对提取 1h 、 2h 、 3h 、 4h 进行了考察。结果见表 5-6 。 表 5-6 不同提取时间提取效果比较 提取时间（ h ） 贝母素甲（ % ） 贝母素乙（ % ） 1 2 3 4 0.0713±0.0002 0.0738±0.0009 0.0737±0.0011 0.0735±0.0006 0.0585±0.0002 0.0630±0.0018 0.0639±0.0009 0.0632±0.0002 结果表明， 2h 即已提取完全。 综上，确定最佳提取条件为氨水浸润 1h 后，混合溶剂氯仿 - 甲醇（ 4:1 ）加热回流（ 80℃ ）提取 2h 。 （ 4 ）不同色谱柱的考察 采用 Agilent 1100 系列高效液相色谱仪，考察了三种不同的 C 18 柱对本品分离的影响，结果均能得到较好分离，但因流动相 pH 值较高，建议采用耐高 pH 值的色谱柱，考察结果见图 5-5 。 （ 5 ） 对照品溶液及供试品溶液制备 同正文。 （ 6 ） 线性关系考察 精密量取贝母素甲 (0.2038mg/ml) 及贝母素乙（ 0.2212mg/ml ）混合对照品溶液 5 、 10 、 15 、 20 、 30 m l 注入液相色谱仪，测定峰面积（见表 5-7 、 5-8 ），以进样量（ m g ）的对数（ X ）为横坐标，峰面积的对数（ Y ）为纵坐标，作标准曲线（见图 5-6 、 5-7 ），并以最小二乘法分别计算得回归方程： Y=1.5728X ＋ 2.6517 （ r=0.9995 ）， Y=1.5430X ＋ 2.6202 （ r=0.9999 ），结果显示贝母素甲进样量在 1.0190-6.1140ng 范围内，贝母素乙进样量在 1.1060-6.1140ng 范围内与峰面积呈有良好的线性关系。 表 5-7 线性关系考察结果（贝母素甲） 进样体积（ l ） 进样量 (ng) 峰面积 1 峰面积 2 平均峰面积 lg( 进样量 ) lg( 峰面积 ) 5 1.0190 456.96 444.89 450.93 0.0082 2.6541 10 2.0380 1427.02 1391.65 1409.34 0.3092 3.1490 15 3.0570 2654.25 2646.88 2650.57 0.4853 3.4233 20 4.0760 4087.71 4134.00 4110.85 0.6102 3.6139 30 6.1140 7498.31 7577.75 7538.03 0.7863 3.8773 表 5-8 线性关系考察结果（贝母素乙） 进样体积（ l ） 进样量 (ng) 峰面积 1 峰面积 2 平均峰面积 lg( 进样量 ) lg( 峰面积 ) 5 1.1060 464.88 505.50 485.19 0.0438 2.6859 10 2.2120 1418.57 1413.59 1416.08 0.3448 3.1511 15 3.3180 2630.38 2696.10 2663.24 0.5209 3.4254 20 4.4240 4248.14 4185.00 4216.57 0.6458 3.6250 30 6.6360 7559.32 7664.95 7612.14 0.8219 3.8815 图 5-6 贝母素甲的标准曲线图 图 5-7 贝母素乙的标准曲线图 （ 7 ）精密度试验 取对照品溶液，按以上色谱条件，重复进样 6 次，测定峰面积，结果见表 5-9 。 表 5-9 精密度试验结果 编号 供试品峰面积 平均值 RSD （ % ） 1 1503.8 2 1431.3 贝母素甲 3 1404.2 1426.7 2.9 4 1365.5 5 1420.6 6 1434.8 1 1496.8 2 1427.0 贝母素乙 3 1425.0 1429.4 2.5 4 1374.9 5 1419.7 6 1432.9 （ 8 ） 重复性试验 分别称取浙贝母药材粉末（象贝， 60 目， 60℃ 烘 2h ） 6 份，精密称定，按正文中“供试品溶液的制备”项制备供试品溶液并测定峰面积，以外标法计算贝母素甲和贝母素乙的含量（ % ），计算测定结果的 RSD 值。结果见表 5-10 。 表 5-10 重复性试验结果（ n=6 ） 序号 贝母素甲（ % ） 贝母素乙（ % ） 1 2 3 4 5 6 X±SD RSD (%) 0.0715±0.0024 0.0694±0.0009 0.0722±0.0007 0.0731±0.0022 0.0703±0.0006 0.0703±0.0011 0.0711±0.0014 1.8 0.0637±0.0008 0.0624±0.0002 0.0645±0.0006 0.0646±0.0010 0.0632±0.0004 0.0625±0.0009 0.0635±0.0009 1.4 （ 9 ） 稳定性试验 取 “ 重复性试验 ” 项下一份供试品溶液，分别于 0 ， 2 ， 4 ， 6 ， 8 小时进样，测定其中贝母素甲和贝母素乙的含量（ % ），计算测定结果的 RSD 值。结果见表 5-11 。 表 5-11 稳定性试验结果 时间（ h ） 贝母素甲（ % ） 贝母素乙（ % ） 0 2 4 6 8 X±SD RSD(%) 0.0715 0.0736 0.0724 0.0708 0.0720 0.0720±0.0010 1.3 0.0637 0.0660 0.0647 0.0651 0.0659 0.0651±0.0009 1.3 （ 10 ）加样回收率试验 取已知含量的浙贝母药材粉末（象贝， 60 目， 60℃ 烘 2h ） 1.0g ，平行 6 份，等量分别精密加入贝母素甲和贝母素乙对照品适量，按正文中 “ 供试品溶液的制备 ” 项制备供试品溶液并测定峰面积，计算加样回收率。结果见表 5-12 。 表 5-12 加样回收率试验结果（ n=6 ） 药材中含量 （ mg ） 加入量 （ mg ） 测得总量 （ mg ） 回收率 （ % ） # 平均回收率 （ % ） 贝母素甲 0.711 0.655 1.395 104.4 102.7 0.711 0.655 1.359 98.9 0.711 0.655 1.397 104.5 0.711 0.655 1.393 104.1 0.711 0.655 1.388 103.4 0.711 0.655 1.370 100.6 贝母素乙 0.635 0.563 1.206 101.5 98.7 0.635 0.563 1.198 100.0 0.635 0.563 1.207 101.6 0.635 0.563 1.185 97.6 0.635 0.563 1.171 95.2 0.635 0.563 1.178 96.5 # 回收率（ % ） = [ （测得总量 – 药材中含量） / 加入量 ] ×100% （ 11 ）样品测定 原起草单位中国药科大学计算方法采用外标一点法，根据蒸发光散射检测器的原理，浓度与峰面积并非直接成线性关系，后改为对数外标两点法计算，故正文中改为对数外标两点法计算，并经我所复核，方法可行。按正文方法测定了 23 批样品（其中有 3 批系两起草单位重复测定），结果见表 5-13 、 5-14 。 表 5-13 17 批样品中贝母素甲、贝母素乙的含量（ % ）（以对数外标两点法计算） 商品来源 规格 贝母素甲的含量 贝母素乙的含量 宁波 象贝 0.0755 0.0744±0.0011 0.0667 0.0662±0.0005 0.0733 0.0657 大浙贝 1 0.0795 0.0794±0.0001 0.0586 0.0597±0.0011 0.0793 0.0609 大浙贝 2 0.0835 0.0904±0.0069 0.0587 0.0651±0.0064 0.0972 0.0714 大浙贝 3 ( 石灰炮制 ) 0.0404 0.0409±0.0005 0.0348 0.0355±0.0007 0.0414 0.0362 小浙贝 1 （ ?<1cm ） 0.2160 0.2209±0.0049 0.1326 0.1324±0.0002 0.2257 0.1322 小浙贝 2 （ ?0.7~1cm ） 0.2064 0.2026±0.0037 0.1154 0.1149±0.0005 0.1989 0.1145 小浙贝 3 （ ?<0.7cm ） 0.2579 0.2495±0.0080 0.1284 0.1272±0.0013 0.2410 0.1259 小浙贝 4 （ ?<0.7cm ， H 2 O 2 炮制） 0.1303 0.1315±0.0012 0.0853 0.0877±0.0024 0.1327 0.0900 上海 大浙贝 （饮片） 0.1265 0.1297±0.0033 0.0798 0.0818±0.0020 0.1330 0.0839 广州 大浙贝 1 （饮片） 0.0975 0.0974±0.0001 0.0748 0.0751±0.0003 0.0972 0.0753 大浙贝 2 （饮片） 0.1169 0.1167±0.0002 0.0733 0.0742±0.0008 0.1164 0.0750 南京 大浙贝 1 （饮片） 0.1118 0.1105±0.0013 0.0861 0.0858±0.0004 0.1092 0.0854 大浙贝 2 0.0550 0.0564±0.0014 0.0390 0.0398±0.0008 0.0578 0.0405 天津 大浙贝 1 （饮片） 0.1109 0.1086±0.0023 0.0762 0.0739±0.0022 0.1063 0.0716 大浙贝 2 （饮片） 0.0878 0.0880±0.0003 0.0778 0.0776±0.0002 0.0883 0.0774 大浙贝 3 0.1468 0.1463±0.0005 0.0931 0.0928±0.0003 0.1458 0.0926 沈阳 大浙贝 0.1151 0.1554±0.0043 0.1099 0.1130±0.0031 0.1597 0.1160 表 5-14 6 批样品中贝母素甲、贝母素乙的含量（ % ）（以对数外标两点法计算） 编号 来源 贝母素甲 贝母素乙 含量（％） 相对平均偏差（％） 含量（％） 相对平均偏差（％） 1 浙贝（珠贝） 0.1743 0.3 0.0738 0.2 0.1722 0.0731 2 浙贝（磐安立夏采收） 0.0577 0.5 0.0338 0.8 0.0565 0.0328 3 浙贝（亳州） 0.0749 1.1 0.0472 0.1 0.0717 0.0469 4 浙贝（宁波） 2 0.0619 0.7 0.0488 0.6 0.0637 0.0499 5 浙贝（天津） 0.0947 0.2 0.0600 0 0.0941 0.0601 6 浙贝（广州） 0.0794 0.5 0.0494 0.2 0.0810 0.0497 根据 17 批样品的检测结果，将限度定为 “ 本品以干燥品计算，含贝母素甲（ C 27 H 45 NO 3 ）和贝母素乙（ C 27 H 43 NO 3 ）的总量不得少于 0.08% 。
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