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■ 未提出质粒或质粒得率较低： △ 大肠杆菌老化 请涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养。 △ 质粒拷贝数低 由于低使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低，可更换具有相同功能的高拷 贝数载体。 △ 菌体中无质粒 有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。 例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定，因此不要频繁转接，每次接种时 应接种单菌落。另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。 △ 碱裂解不充分 使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，可减少菌体用量或增加溶液P
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