银染操作中的一点心得

银染方法是一种重要的染色方法，由于其成本低，所用试剂安全、快速、灵敏度高而被广泛应用。在本研究中，作者发现染色结果影响最大的为硝酸银染色步骤，硝酸银染色时间过短，会造成显色时胶的背景过深。研究结果表明，当染色时间超过30 min时，表现为胶的背景较浅，条带清晰、易于辨认；而洗脱步骤也较大的影响检测效果，最好使用去离子水，防止自来水中的cl-等离子干扰银染结果；另外，每做完一步都要用蒸馏水洗脱2~3次，特别是染色步骤后一定要将银离子洗净，否则会造成染色背景深与条带较浅的后果。此外，丙烯酰胺凝胶过厚与染色时较高的水温等也会造成胶的背景过深。本人是做SSR分析的，现在也把SSR凝胶电泳条带判读与各位大侠交流交流。SSR检测其多态性通常是PCR产物在变性后通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测。在变性的聚丙烯酰胺凝胶上电泳8~10 h后（研究中没有用测序胶，而是用小的垂直板），我们可以看到双链DNA电泳时速度比单链DNA速度快（这可能是由于没有用测序胶，跑电泳时电压太小，无法保证玻璃板一直处于较高的温度，而使部分单链复性的缘故），在胶的较下位置（接近胶底部）。在条带的判读时，我们看单链的差异，可以忽略双链带的干扰。当前，对微卫星等位基因的鉴别是通过测定包含微卫星的PCR扩增产物片段大小来进行的。微卫星为共显性遗传，在二倍体中应
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